<?xml version="1.0" encoding="UTF-8"?>
<!DOCTYPE root>
<article xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" xmlns:xlink="http://www.w3.org/1999/xlink" xmlns:xsi="http://www.w3.org/2001/XMLSchema-instance" xmlns:ali="http://www.niso.org/schemas/ali/1.0/" article-type="research-article" dtd-version="1.2" xml:lang="en"><front><journal-meta><journal-id journal-id-type="publisher-id">Medical and Social Expert Evaluation and Rehabilitation</journal-id><journal-title-group><journal-title xml:lang="en">Medical and Social Expert Evaluation and Rehabilitation</journal-title><trans-title-group xml:lang="ru"><trans-title>Медико-социальная экспертиза и реабилитация</trans-title></trans-title-group></journal-title-group><issn publication-format="print">1560-9537</issn><issn publication-format="electronic">2412-2092</issn><publisher><publisher-name xml:lang="en">Eco-Vector</publisher-name></publisher></journal-meta><article-meta><article-id pub-id-type="publisher-id">623477</article-id><article-id pub-id-type="doi">10.17816/MSER623477</article-id><article-categories><subj-group subj-group-type="toc-heading" xml:lang="en"><subject>Original study articles</subject></subj-group><subj-group subj-group-type="toc-heading" xml:lang="ru"><subject>Оригинальные исследования</subject></subj-group><subj-group subj-group-type="article-type"><subject>Research Article</subject></subj-group></article-categories><title-group><article-title xml:lang="en">Diagnostic and clinical significance of cell free DNA levels in patients with chronic heart failure</article-title><trans-title-group xml:lang="ru"><trans-title>Диагностическая и клиническая значимость уровня свободно циркулирующей ДНК у пациентов с хронической сердечной недостаточностью</trans-title></trans-title-group></title-group><contrib-group><contrib contrib-type="author"><contrib-id contrib-id-type="orcid">https://orcid.org/0009-0001-7622-1438</contrib-id><contrib-id contrib-id-type="spin">1460-3733</contrib-id><name-alternatives><name xml:lang="en"><surname>Kolesnikova</surname><given-names>Elena V.</given-names></name><name xml:lang="ru"><surname>Колесникова</surname><given-names>Елена Викторовна</given-names></name></name-alternatives><address><country country="RU">Russian Federation</country></address><email>elenaolimp03@mail.ru</email><xref ref-type="aff" rid="aff1"/></contrib><contrib contrib-type="author"><contrib-id contrib-id-type="orcid">https://orcid.org/0000-0003-1030-8319</contrib-id><contrib-id contrib-id-type="spin">2206-0700</contrib-id><name-alternatives><name xml:lang="en"><surname>Puzin</surname><given-names>Sergey  N.</given-names></name><name xml:lang="ru"><surname>Пузин</surname><given-names>Сергей Николаевич</given-names></name></name-alternatives><address><country country="RU">Russian Federation</country></address><bio xml:lang="en"><p>MD, Dr. Sci. (Med.), professor, academician of the RAS</p></bio><bio xml:lang="ru"><p>доктор мед. наук, профессор, академик РАН</p></bio><email>s.pusin2012@yandex.ru</email><xref ref-type="aff" rid="aff2"/></contrib><contrib contrib-type="author"><contrib-id contrib-id-type="orcid">https://orcid.org/0000-0002-6124-4469</contrib-id><contrib-id contrib-id-type="spin">6814-8345</contrib-id><name-alternatives><name xml:lang="en"><surname>Myachina</surname><given-names>Olga V.</given-names></name><name xml:lang="ru"><surname>Мячина</surname><given-names>Ольга Владимировна</given-names></name></name-alternatives><address><country country="RU">Russian Federation</country></address><bio xml:lang="en"><p>MD, Dr. Sci. (Med.), associate professor, Head of the Department of Biology</p></bio><bio xml:lang="ru"><p>доктор мед. наук, доцент, заведующая кафедрой биологии</p></bio><email>olga_v_myachina@mail.ru</email><xref ref-type="aff" rid="aff1"/></contrib><contrib contrib-type="author"><contrib-id contrib-id-type="orcid">https://orcid.org/0000-0003-2454-0397</contrib-id><contrib-id contrib-id-type="spin">1089-6438</contrib-id><name-alternatives><name xml:lang="en"><surname>Pashkov</surname><given-names>Aleksander N.</given-names></name><name xml:lang="ru"><surname>Пашков</surname><given-names>Александр Николаевич</given-names></name></name-alternatives><address><country country="RU">Russian Federation</country></address><bio xml:lang="en"><p>Dr. Sci. (Biol.), professor</p></bio><bio xml:lang="ru"><p>доктор биол. наук, профессор</p></bio><email>vgma-pashkov@yandex.ru</email><xref ref-type="aff" rid="aff1"/></contrib></contrib-group><aff-alternatives id="aff1"><aff><institution xml:lang="en">Burdenko Voronezh State Medical University</institution></aff><aff><institution xml:lang="ru">Воронежский государственный медицинский университет им. Н.Н. Бурденко</institution></aff></aff-alternatives><aff-alternatives id="aff2"><aff><institution xml:lang="en">Russian Medical Academy of Continuing Professional Education</institution></aff><aff><institution xml:lang="ru">Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования</institution></aff></aff-alternatives><pub-date date-type="preprint" iso-8601-date="2023-12-15" publication-format="electronic"><day>15</day><month>12</month><year>2023</year></pub-date><pub-date date-type="pub" iso-8601-date="2023-12-16" publication-format="electronic"><day>16</day><month>12</month><year>2023</year></pub-date><volume>26</volume><issue>3</issue><issue-title xml:lang="en"/><issue-title xml:lang="ru"/><fpage>155</fpage><lpage>164</lpage><history><date date-type="received" iso-8601-date="2023-11-16"><day>16</day><month>11</month><year>2023</year></date><date date-type="accepted" iso-8601-date="2023-12-11"><day>11</day><month>12</month><year>2023</year></date></history><permissions><copyright-statement xml:lang="en">Copyright ©; 2023, Eco-Vector</copyright-statement><copyright-statement xml:lang="ru">Copyright ©; 2023, Эко-Вектор</copyright-statement><copyright-year>2023</copyright-year><copyright-holder xml:lang="en">Eco-Vector</copyright-holder><copyright-holder xml:lang="ru">Эко-Вектор</copyright-holder><ali:free_to_read xmlns:ali="http://www.niso.org/schemas/ali/1.0/" start_date="2026-12-16"/></permissions><self-uri xlink:href="https://rjmseer.com/1560-9537/article/view/623477">https://rjmseer.com/1560-9537/article/view/623477</self-uri><abstract xml:lang="en"><p><bold>BACKGROUND</bold>: Chronic heart failure CHF remains one of the main causes of disability in patients with cardiovascular diseases. Leading to the development of persistent dysfunctions of the entire body, CHF significantly reduces the quality of life and worsens the patient’s prognosis. Therefore, it is so important to promptly identify the disease and carry out optimal therapy, which will delay the onset of irreversible consequences.</p> <p><bold>AIM:</bold> Analysis of cell free DNA level of in the blood plasma in patients with chronic heart failure and identification of differences in the studied indicator depending on the clinical characteristics of the patient.</p> <p><bold>MATERIALS AND METHODS:</bold> The study included 67 patients diagnosed with chronic heart failure and 23 healthy volunteers who were in satisfactory health, who made up the comparison group. All subjects underwent a gender and age assessment, analysis of risk factors, anthropometric indicators with calculation of body mass index. In patients with CHF, clinical and biochemical blood tests were performed to determine NT-proBNP, lipid profile, glucose and creatinine; In addition, an instrumental examination was performed, including electrocardiography, echocardiography, fundus examination, ultrasound examination of the abdominal organs, chest radiography, and a 6-minute walk test to assess the functional class. The level of cell free DNA was determined according to the method of P.P. Laktionova, S.N. Tamkovich, E.Yu. Rykova (2005). In the study group of patients, the causes of CHF development were analyzed, and the presence of a history of myocardial infarction and its duration were separately taken into account.</p> <p><bold>RESULTS:</bold> The study established the average level of cell free DNA for patients with CHF (273.5±25.26 ng/ml) and in the comparison group (53.7±3.5 ng/ml), which is a statistically significant difference (p=0,00). Analysis of the causes of chronic heart failure revealed a combination of coronary heart disease and arterial hypertension as the main etiological factor; the number of patients in the study group was 58%. A decrease in exercise tolerance, revealed during the 6 minute walk test, is accompanied by an increase in the level of cell free DNA in the blood, with a progressive increase in concentration from functional class I (141.9±26.3 ng/ml) to functional class III (447.7±51.7 ng/ml). Among patients suffering from coronary artery disease, a history of myocardial infarction leads to an increase in the level of free circulating DNA by almost 2 times compared with patients with a stable course of coronary heart disease. Also, the level of free circulating DNA depends on the duration of acute myocardial infarction, demonstrating a significant difference between the early (440.8±87.6 ng/ml) and late recovery period (225.5±46.5 ng/ml).</p> <p><bold>CONCLUSION:</bold> Significant differences in cell free DNA levels were revealed between the group of patients with CHF and the control group, which allows us to consider this marker as a potential diagnostic criterion for CHF</p></abstract><trans-abstract xml:lang="ru"><p><bold>Обоснование.</bold> Хроническая сердечная недостаточность ХСН остаётся одной из главных причин инвалидизации пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями. Приводя к развитию стойких нарушений функций всего организма, ХСН значительно снижает качество жизни и ухудшает прогноз пациента. Поэтому так важно своевременно выявить заболевание и проводить оптимальную терапию, которая позволит отсрочить наступление необратимых последствий.</p> <p><bold>Цель.</bold> Анализ уровня свободно циркулирующей ДНК в плазме крови у больных с хронической сердечной недостаточностью и выявление различий исследуемого показателя в зависимости от клинических особенностей пациента.</p> <p><bold>Материалы и методы.</bold> В исследование были включены 67 пациентов с диагнозом «хроническая сердечная недостаточность» и 23 здоровых добровольца, имеющих удовлетворительное самочувствие, которые составили группу сравнения. У всех обследованных проведены половозрастная оценка, анализ факторов риска, антропометрических показателей с расчётом индекса массы тела. У больных ХСН проведён клинический и биохимический анализ крови с определением показателей NT-proBNP, липидного профиля, глюкозы и креатинина; кроме того, выполнены инструментальное обследование, включающее электрокардиографию, эхокардиографию, исследование глазного дна, ультразвуковое исследование органов брюшной полости, рентгенографию органов грудной клетки, и тест с 6-минутной ходьбой для оценки функционального класса. Уровень свободно циркулирующей ДНК определяли по методу П.П. Лактионова, С.Н. Тамкович, Е.Ю. Рыковой (2005). В исследуемой группе больных проводили анализ причин развития ХСН, отдельно учитывали наличие инфаркта миокарда в анамнезе и его давность.</p> <p><bold>Результаты.</bold> В ходе исследования установлен средний уровень свободно циркулирующей ДНК для пациентов с ХСН (273,5±25,26 нг/мл) и в группе сравнения (53,7±3,5 нг/мл), что составляет статистически значимую разницу (p=0,00). Анализ причин развития хронической сердечной недостаточности выявил сочетание ишемической болезни сердца и артериальной гипертензии как основной этиологический фактор, количество пациентов в исследуемой группе составило 58%. Снижение толерантности к физической нагрузке, выявленное при проведении теста с 6-минутной ходьбой, сопровождается ростом уровня свободно циркулирующей ДНК в крови с прогрессирующим увеличением концентрации от I (141,9±26,3 нг/мл) до III функционального класса (447,7±51,7 нг/мл). У пациентов, страдающих ишемической болезнью сердца, наличие инфаркта миокарда в анамнезе приводит к повышению уровня свободно циркулирующей ДНК практически в 2 раза по сравнению с больными со стабильным течением ишемической болезни сердца. Также уровень свободно циркулирующей ДНК зависит от давности острого инфаркта миокарда, демонстрируя значимое различие между ранним (440,8±87,6 нг/мл) и поздним восстановительным периодом (225,5±46,5 нг/мл).</p> <p><bold>Заключение.</bold> Выявлены значимые различия уровня свободно циркулирующей ДНК между группой пациентов с ХСН и контрольной группой, что позволяет рассматривать данный маркер в качестве потенциального диагностического критерия ХСН.</p></trans-abstract><kwd-group xml:lang="en"><kwd>cell free DNA</kwd><kwd>chronic heart failure</kwd><kwd>biomarkers</kwd><kwd>myocardial infarction</kwd><kwd>cardiovascular disease</kwd></kwd-group><kwd-group xml:lang="ru"><kwd>свободно циркулирующая ДНК</kwd><kwd>хроническая сердечная недостаточность</kwd><kwd>биомаркеры</kwd><kwd>инфаркт миокарда</kwd><kwd>сердечно-сосудистые заболевания</kwd></kwd-group><funding-group/></article-meta></front><body></body><back><ref-list><ref id="B1"><label>1.</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="en">2020 Clinical practice guidelines for Chronic heart failure. Russian Journal of Cardiology. 2020;25(11):4083. (In Russ). doi: 10.15829/1560-4071-2020-4083</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="ru">Хроническая сердечная недостаточность. Клинические рекомендации 2020 // Российский кардиологический журнал. 2020. Т. 25, № 11. С. 4083. doi: 10.15829/1560-4071-2020-4083</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="B2"><label>2.</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="en">Ageev FT, Arutyunov GP, Belenkov YuN, et al. Chronic heart failure. Moscow: GEOTAR-Media; 2010. 336 p. (in Russ).</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="ru">Агеев Ф.Т., Арутюнов Г.П., Беленков Ю.Н., и др. Хроническая сердечная недостаточность. Москва: ГЭОТАР-Медиа, 2010. 336 с.</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="B3"><label>3.</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="en">Shah SJ. BNP: Biomarker Not Perfect in heart failure with preserved ejection fraction. European Heart Journal. 2022;43(20):1952–1954. doi: 10.1093/eurheartj/ehac121</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="ru">Shah S.J. BNP: Biomarker Not Perfect in heart failure with preserved ejection fraction // European Heart Journal. 2022. Vol. 43, № 20. P. 1952–1954. doi: 10.1093/eurheartj/ehac121</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="B4"><label>4.</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="en">Yancy CW, Jessup M, Bozkurt B, et al. Focused Update of the 2013 AC-CF/AHA Guideline for the Management of Heart Failure: A Report of the American College of Cardiology/American Heart Association Task Force on Clinical Practice Guidelines and the Heart Failure Society of America. Circulation. 2017;136(6):137–161. doi: 10.1161/CIR.0000000000000509</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="ru">Yancy C.W., Jessup M., Bozkurt B., et al. Focused Update of the 2013 AC-CF/AHA Guideline for the Management of Heart Failure: A Report of the American College of Cardiology/American Heart Association Task Force on Clinical Practice Guidelines and the Heart Failure Society of America // Circulation. 2017. Vol. 136, № 6. P. 137–161. doi: 10.1161/CIR.0000000000000509</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="B5"><label>5.</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="en">Trofimova EA, Kireeva VV, Usoltsev YuK, et al. Circulating free DNA in hypertensive patients with high cardiovascular risk. Russian Journal of Cardiology. 2022;27(4):4709. (In Russ). doi: 10.15829/1560-4071-2022-4709</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="ru">Трофимова Е.А., Киреева В.В., Усольцев Ю.К., и др. Свободно циркулирующая ДНК у больных артериальной гипертензией с высоким сердечно-сосудистым риском // Российский кардиологический журнал. 2022. Т. 27, № 4. С. 4709. doi: 10.15829/1560-4071-2022-4709</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="B6"><label>6.</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="en">Polina IA, Ilatovskaya DV, DeLeon-Pennell KY. Cell free DNA as a diagnostic and prognostic marker for cardiovascular diseases. Clin Chim Acta. 2020;503:145–150. doi: 10.1016/j.cca.2020.01.013</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="ru">Polina I.A., Ilatovskaya D.V., DeLeon-Pennell K.Y. Cell free DNA as a diagnostic and prognostic marker for cardiovascular diseases // Clin Chim Acta. 2020. Vol. 503. P. 145–150. doi: 10.1016/j.cca.2020.01.013</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="B7"><label>7.</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="en">Zemmour H, Planer D, Magenheim J, et al. Non-invasive detection of human cardiomyocyte death using methylation patterns of circulating DNA. Nat Commun. 2018;9(1):1443. doi: 10.1038/s41467-018-03961-y</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="ru">Zemmour H., Planer D., Magenheim J., et al. Non-invasive detection of human cardiomyocyte death using methylation patterns of circulating DNA // Nat Commun. 2018. Vol. 9, № 1. P. 1443. doi: 10.1038/s41467-018-03961-y</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="B8"><label>8.</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="en">Yokokawa T, Misaka T, Kimishima Y, et al. Clinical significance of circulating cardiomyocyte-specific cell-free DNA in patients with heart failure: a proof-of-concept study. Can J Cardiol. 2020;36(6):931–935. doi: 10.1016/j.cjca.2019.10.016</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="ru">Yokokawa T., Misaka T., Kimishima Y., et al. Clinical Significance of Circulating Cardiomyocyte-Specific Cell-Free DNA in Patients with Heart Failure: A Proof-of-Concept Study // Can J Cardiol. 2020. Vol. 36, № 6. P. 931–935. doi: 10.1016/j.cjca.2019.10.016</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="B9"><label>9.</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="en">Karper JC, Ewing MM, Habets KL, et al. Blocking toll-like receptors 7 and 9 reduces postinterventional remodeling via reduced macrophage activation, foam cell formation, and migration. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2012;32(8):72–80. doi: 10.1161/ATVBAHA.112.249391</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="ru">Karper J.C., Ewing M.M., Habets K.L., et al. Blocking toll-like receptors 7 and 9 reduces postinterventional remodeling via reduced macrophage activation, foam cell formation, and migration // Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2012. Vol. 32, № 8. P. 72–80. doi: 10.1161/ATVBAHA.112.249391</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="B10"><label>10.</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="en">Ingle L, Cleland JG, Clark AL. The long-term prognostic significance of 6-minute walk-test distance in patients with chronic heart failure. Biomed Res Int. 2014;2014:505969. doi: 10.1155/2014/505969</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="ru">Ingle L., Cleland J.G., Clark A.L. The long-term prognostic significance of 6-minute walk-test distance in patients with chronic heart failure // Biomed Res Int. 2014. Vol. 2014. Р. 505969. doi: 10.1155/2014/505969</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="B11"><label>11.</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="en">Patent RUS № 2232768/ 07.20.2004. Byul. № 20. A method for isolating the DNA of microorganisms. Laktionov PP, Tamkovich SN, Simonov PA, et al. Available from: https://patents.google.com/patent/RU2232768C2/ru</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="ru">Патент РФ на изобретение № 2232768/ 20.07.2004. Бюл. № 20. Лактионов П.П., Тамкович С.Н., Симонов П.А., и др. Способ выделения ДНК микроорганизмов. Режим доступа: https://patents.google.com/patent/RU2232768C2/ru</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="B12"><label>12.</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="en">Teo YV, Capri M, Morsiani C, et al. Cell-free DNA as a biomarker of aging. Aging Cell. 2019;18(1):e12890. doi: 10.1111/acel.12890</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="ru">Teo Y.V., Capri M., Morsiani C., et al. Cell-free DNA as a biomarker of aging // Aging Cell. 2019. Vol. 18, № 1. Р. e12890. doi: 10.1111/acel.12890</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="B13"><label>13.</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="en">Wu B, Ni H, Li J, et al. The Impact of Circulating Mitochondrial DNA on Cardiomyocyte Apoptosis and Myocardial Injury After TLR4 Activation in Experimental Autoimmune Myocarditis. Cell Physiol Biochem. 2017;42(2):713–728. doi: 10.1159/000477889</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="ru">Wu B., Ni H., Li J., et al. The Impact of Circulating Mitochondrial DNA on Cardiomyocyte Apoptosis and Myocardial Injury After TLR4 Activation in Experimental Autoimmune Myocarditis // Cell Physiol Biochem. 2017. Vol. 42, № 2. P. 713–728. doi: 10.1159/000477889</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="B14"><label>14.</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="en">Aronov DM. Cardiac rehabilitation and secondary prevention. Moscow: GEOTAR-Media; 2021. 337 p. (in Russ).</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="ru">Аронов Д.М. Кардиореабилитация и вторичная профилактика. Москва: ГЭОТАР-Медиа, 2021. 337 с.</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="B15"><label>15.</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="en">Fomin IV, Belenkov YuN, Mareev VYu. The prevalence of chronic heart failure in the European part of the Russian Federation (part 1) — EPOCHA-CHF data. Journal of Heart Failure. 2006;7,1(35):4–7. (in Russ). doi: 10.15829/1560-4071-2016-8-7-13</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="ru">Фомин И.В., Беленков Ю.Н., Мареев В.Ю., и др. Распространённость хронической сердечной недостаточности в европейской части Российской Федерации (часть 1) — данные ЭПОХА-ХСН // Сердечная недостаточность. 2006. Т. 7, № 1(35). С. 4–7. doi: 10.15829/1560-4071-2016-8-7-13</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="B16"><label>16.</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="en">Chaulin AM, Abashina OE, Duplyakov DV. Highly sensitive cardiac troponins (hs-Tn): methods of determination and main analytical characteristics. Cardiovascular Therapy and Prevention. 2021;20(2):2590. (in Russ). doi: 10.15829/1728-8800-2021-2590</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="ru">Чаулин А.М., Абашина О.Е., Дупляков Д.В. Высокочувствительные сердечные тропонины (hs-Tn): методы определения и основные аналитические характеристики // Кардиоваскулярная терапия и профилактика. 2021. Т. 20, № 2. С. 2590. doi: 10.15829/1728-8800-2021-2590</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="B17"><label>17.</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="en">Shimony A, Zahger D, Gilutz H, et al. Cell free DNA detected by a novel method in acute ST-elevation myocardial infarction patients. Acute Card Care. 2010;12(3):109–111. doi: 10.3109/17482941.2010.513732</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="ru">Shimony A., Zahger D., Gilutz H., et al. Cell free DNA detected by a novel method in acute ST-elevation myocardial infarction patients // Acute Card Care. 2010. Vol. 12, № 3. P. 109–111. doi: 10.3109/17482941.2010.513732</mixed-citation></citation-alternatives></ref></ref-list></back></article>
